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第四节 革兰阴性发酵菌(第1页)

肠杆菌科细菌(Enterobacteriacence)

肠杆菌科细菌是临床标本中最常见的革兰阴性杆菌。

正如其名,肠杆菌科细菌在人类和动物的肠道内大量存在,随人和动物的排泄物广泛分布于土壤、水和腐物中。

大多数肠杆菌科细菌是肠道的正常菌群,但当宿主免疫力降低或细菌侵入肠道外部位(移位定植)等特定条件下可成为条件致病菌而引起疾病。

有些肠杆菌科细菌是致病菌,主要有伤寒沙门菌、志贺菌、致病性的大肠埃希菌、耶尔森菌等;也有些肠杆菌科细菌是与医院感染有关的条件致病菌,如克雷伯菌属,肠杆菌属等。

近年来,肠杆菌科细菌的耐药性问题越来越突出,特别是由β-内酰胺酶介导的耐药性问题。

由于能水解新底物的β-内酰胺酶不断出现、对β-内酰胺酶抑制剂敏感性降低的β-内酰胺酶的出现,以及在同一个细菌体内有几种β-内酰胺酶型别同时出现等情况,使一些临床常见肠杆菌科细菌获得了更强的针对β-内酰胺类抗生素的耐药能力,而导致治疗失败,给临床诊断和感染控制带来巨大的挑战。

目前,临床上重要的β-内酰胺酶有四种:

1.超广谱B内酰胺酶(ESBLs):经典的ESBLs最早由克雷伯菌属和大肠埃希菌等肠杆菌科细菌产生,对所有一二三代头孢菌素、氨曲南、青霉素类均耐药,对碳青霉烯类(如亚胺培南)、头霉烯类(如头孢西丁、头孢美唑、头孢替坦)等敏感,体外对酶抑制剂敏感。

由于耐药质粒的播散,从肠杆菌科其他菌中也可分离出ESBLs。

2.对β-内酰胺酶抑制剂敏感性下降的β-内酰胺酶:可从大肠埃希菌、克雷伯菌和奇异变形杆菌中检出。

表型特征是对阿莫西林和替卡西林耐药,对阿莫西林/克拉维酸和替卡西林/克拉维酸中介或耐药,而对头孢菌素敏感。

3.质粒介导的AmpC酶:质粒AmpC酶可见于克雷伯菌、沙门菌、弗劳地枸橼酸杆菌,肠杆菌属细菌、奇异变形杆菌和大肠埃希菌等,常携带大质粒,同时编码对其他类抗生素的耐药性,表现为对第一至第三代头孢菌素、头孢霉素类、氨基糖苷类抗生素均耐药,但对碳青霉烯类、第四代头孢菌素敏感。

4.碳青霉烯水解酶:是指所有能水解碳青霉烯类的B一内酰胺酶。

随着碳青霉烯类抗生素使用的增多,由细菌产生碳青霉烯水解酶而造成的耐药性也在上升。

该酶具有更为广泛的底物谱,几乎对所有β-内酰胺酶类抗生素均耐药。

1.直接检查:涂片染色镜检。

该方法对肠杆菌科细菌的感染诊断帮助不大。

2.培养:标本接种血琼脂平板、肠道菌弱选择平板(如伊红美兰琼脂、麦康凯琼脂)、肠道菌强选择平板(SS琼脂),选择可疑菌落接种克氏双糖铁培养基或三糖铁培养基,该科细菌营养要求不高,氧化酶阴性,发酵葡萄糖,经生化试验、血清学试验最后鉴定到种。

3.药敏:

(I)ESBLs酶的检测:按NCCLS推荐的标准纸片扩散法测定ESBls:采用头孢噻肟(CTX,30mg)及头孢噻肟,克拉维酸(CTXL,30mglOmg)组合、头孢他啶(CAZ,30mg)及头孢他啶/克拉维酸(CAZL,30mglOmg)组合。

任一组药敏的抑菌环直径相差≥5mm时,判定ESBLs阳性。

(2)A25922制成0.5麦氏浊度的菌悬液均匀涂布于M-H琼脂平板,平板中心贴30mgFOX纸片,以刀片均匀蘸取受试菌,在距FOX纸片边缘3mm处与纸片直径平行垂直将灭菌刀片插入琼脂,轻轻抽出刀片,使琼脂自然闭合,置35℃孵育过夜。

若切割线外的抑菌圈缩小即为阳性,提示产AmpC酶,反之为阴性。

(3)金属酶的检测:纸片协同试验,0.5麦氏单位待测菌菌液均匀涂布M-H琼脂平板,中间贴10mgIMP和30mgCAZ纸片,距纸片15~25cm处贴一空白纸片,加2~3mL2-巯基乙醇原液。

35℃培养过夜,如靠近2-巯基乙醇侧IMP和CAZ抑菌环有扩大者为产金属酶菌株。

埃希菌属(Escherichia)

埃希菌属包括5个种,其中以大肠埃希菌最重要。

它们一般不致病,是人类和动物肠道的正常菌群。

大肠埃希茵在婴儿出生后数小时就进入肠道并终生伴随。

某些特殊菌株致病性强,能直接导致肠道感染。

当机体抵抗力降低或发生定位转移时可造成感染,以化脓性炎症最为常见。

埃希菌属是机体抵抗力降低时发生医院感染的重要病原菌之一,也是食物和饮料的卫生学标准。

所致疾病可分两类:

1.肠道外感染:大肠埃希菌是临床分离的革兰阴性菌中最常见的菌种,可引起各种类型的感染,以泌尿系感染为主,如尿道炎、膀胱炎、肾盂肾炎。

还可引起菌血症、败血症、肺炎、腹膜炎、胆囊炎、阑尾炎、术后创口感染,以及新生儿的脑膜炎等,属条件致病菌感染,多见于婴儿、老年人和免疫功能极度低下者。

有时与类杆菌、粪肠球菌混合感染,产生的脓液黏稠,有粪臭味。

2.肠道内感染:主要为腹泻。

引起肠道感染的大肠埃希菌主要有5组:

(1)产肠毒素型大肠埃希菌(ETEC):在发展中国家引起婴幼儿和旅游者腹泻,经粪一口感染,由质粒介导产生耐热肠毒素ST和不耐热肠毒素LT而引起腹泻,不侵犯肠黏膜上皮。

导致恶心、腹痛、低热以及急性发作类似霍乱的严重腹泻,也可为轻度水样腹泻。

(2)肠致病性大肠埃希菌(EPEC):是婴幼儿腹泻的主要病原菌,严重者可致死,成人少见。

EPEC多不产生肠毒素(某些菌株产生类志贺毒素),病菌在十二指肠、空肠和回肠上端大量繁殖形成微菌落,导致肠黏膜的刷状缘破坏、绒毛萎缩、上皮细胞排列紊乱和功能受损而造成严重腹泻。

表现为发热、呕吐、腹泻,粪便常为黏液性但无血液。

(3)肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC):相对较少见,引发的肠炎不像大多数大肠埃希菌引发的肠炎而类似与志贺菌,该菌不产生肠毒素,死亡后产生内毒素,导致肠黏膜上皮发生炎症或溃疡。

临床表现为细菌性痢疾样症状。

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